equi-phi29 dna polymerase是 phi29 的改造體,并 經(jīng)多次純化分離而得。在保留了 phi29 dna 聚合酶的鏈置 換、連續(xù)合成特性(>70kb)的基礎(chǔ)上,提高了滾環(huán)擴(kuò)增的 反應(yīng)溫度,該酶酶可以在 42 度條件下持續(xù)的進(jìn)行 dna 合成 (而 phi29 dna 聚合酶在此溫度下反應(yīng)活性很低)。
sau dna polymerase來(lái)源于金黃色葡萄球菌 (staphylococcus aureus),系將 staphylococcus aureus dna 聚合酶 sau i 基因的前 293 個(gè) aa 截去而得。該酶 保留了 sau i 的 5′-3′聚合酶活性,但 5′-3′和 3′-5′核酸 外切酶活性缺失,可用于重組酶擴(kuò)增。
rca滾環(huán)擴(kuò)增試劑盒是新近 發(fā)展起來(lái)的一種恒溫核酸擴(kuò)增方法。以環(huán)狀 dna 為模板, 通過(guò)一個(gè)短的 dna 引物(與部分環(huán)狀模板互補(bǔ)),在 phi29 dna 聚合酶催化下將dntps轉(zhuǎn)變成單鏈dna,此單鏈dna 包含成百上千個(gè)重復(fù)的模板互補(bǔ)片段。